响应面优化硝普钠法测定发酵液中的蛋氨酸含量

摘要：

为了优化硝普钠法(sodium nitroprusside method,SNP)测定发酵液中的蛋氨酸(Met)含量的实验条件,利用紫外可见分光光度计分析不同氨基酸中加入各SNP反应试剂、反应不同时间对反应液吸收峰的影响.在甘氨酸(Gly)添加量、NaOH加入量、SNP加入量、H3PO4加入量、各试剂加入后的反应时间等单因素实验的结果上,利用响应面法优化SNP法.结果 表明:与SNP试剂反应后,除了组氨酸(His)外,其它氨基酸不会对Met的测定产生影响.反应试剂H3PO4的加入对513 nm处吸收峰的形成起决定性作用;发酵液中各成分SNP反应后,最大吸收峰无明显变化.利用单因素和响应面法优化SNP法,得出较佳测定方案:发酵液1500×g离心15 min;5 mL上清液中加入0.74 mL 5 mol/LNaOH和0.15 mL 10％ SNP溶液,摇匀试管,放置30 main;将2mLH3PO4逐滴加到混合物中,振荡试管,反应5 min,在513 nm处测吸收值.当Met浓度为1.0 g/L时,最佳测定条件下吸收值为1.952.通过光谱分析确认Gly的加入会降低Met和His反应的吸收峰值,可通过分析最大吸收峰波长是否在513 nm处,判断样品中是否有组氨酸影响测定.实验获得的SNP法可用于迅速筛选蛋氨酸高产菌.

关键词：发酵液、蛋氨酸、硝普钠反应、紫外可见分光光度计、响应面法

所属期刊栏目：40

分类号：TS201.3(食品工业)

资助基金：苏州科技发展规划农业基础设施项目SYN201507;苏州科技大学科学研究项目XKQ201611

在线出版日期：2019-04-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：256-261