重组大肠杆菌制备副溶血弧菌噬菌体内溶素Lys qdvp001 CHAP域及诱导条件初步优化

摘要：

目的:为了利用噬菌体内溶素防控副溶血弧菌,通过克隆表达工程菌pET30a-CHAP制备目的蛋白,并将以包涵体存在的目的蛋白复性得到有活性的噬菌体内溶素蛋白.方法:首先克隆工程菌pET30a-CHAP,经IPTG的诱导表达后,检测菌液上清中内溶素含量判断表达形式,再进行诱导条件初步优化.通过将表达的pET30a-CHAP包涵体蛋白先用洗涤剂洗涤去除杂蛋白,然后用尿素变性剂溶解,并用Ni2+ SepharoseTM6 Fast Flow亲和层析柱进行层析纯化,用EDTA、氧化型谷胱甘肽、还原型谷胱甘肽等为折叠复性促进剂,经过透析制备可溶性的pET30a-C HAP蛋白,再检测目的蛋白的抑菌活性.结果:本实验确定了重组菌内溶素的表达形式为没有活性的包涵体;初步确定最佳诱导条件为诱导温度为16℃,IPTG终浓度0.5 mmol/L,诱导时间为7h;复性后的内溶素具有抑菌活性.结论:本研究为利用内溶素防控副溶血弧菌以及其他革兰氏阴性细菌提供了制备方法.

关键词：副溶血弧菌、副溶血弧菌噬菌体、内溶素、包涵体复性

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分类号：TS201.3(食品工业)

资助基金：现代农业产业技术体系专项经费资助CARS-47;“十二五”国家科技支撑计划2015BAD16B0902

在线出版日期：2018-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：86-91