李斯特菌噬菌体裂解酶CBD蛋白的克隆与表达

摘要：

单核细胞增生李斯特菌噬菌体的裂解酶中细胞壁结合结构域(CBD)能够特异识别李斯特菌细胞.本研究将CBDP40基因扩增后插入pET32a(+)载体,导入大肠杆菌表达系统,获得重组菌株,并对其进行IPTG诱导表达,分析重组蛋白的活性.聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)表明,经0.1 mmol/L IPTG诱导的重组大肠杆菌BL21(DE3)在38 ku处有明显诱导条带,与预期蛋白分子量相符.经过超声细胞破碎,重组蛋白CBDP40分布在上清液中,通过镍离子螯合亲和层析纯化重组蛋白,洗脱后的蛋白浓度为0.908 mg/mL.经菌体结合和间接ELISA验证,重组蛋白CBDP40具有生物学活性,即对李斯特菌具有识别功能.CBD蛋白的重组表达、纯化及其活性验证,为深入研究裂解酶的理化性质和作用机制奠定了基础.

关键词：单核细胞增生李斯特菌、噬菌体裂解酶、基因表达、亲和层析

所属期刊栏目：37

分类号：TS201.3(食品工业)

资助基金：天津市科技支撑计划项目14ZCZDNC00003.

在线出版日期：2016-09-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：234-237