Microbacterium sp.OU01壳聚糖酶Glu51和Asp69定点突变对酶活性的影响

摘要：

为确定Microbacterium sp.OU01壳聚糖酶特定氨基酸与酶活性间的关系,以含壳聚糖酶基因的pCT7-CHISP6H-mMschito质粒为模板,利用反向PCR的方法对壳聚糖酶两个可能的酶活性位点Glu51(突变成Gln51)和Asp69(突变成Asn69)进行突变,从而构建了两个单位点突变,突变质粒分别转化至Escherichia coli BL21(DE3)并经IPTG诱导表达,测定突变前后酶的比活性,突变酶(Asp69→Asn69)比活力与野生型相比几乎不变,而突变酶(Glu51→Gln51)比活力大约为野生型的10％.通过测定动力学常数发现,突变酶和天然酶Km几乎没有很明显的变化,但是突变酶(Glu51→Gln51)的Vmax与上述两种酶的Vmax相比有很明显的变化.采用DNA Star和Deep view分析软件,预测突变前后壳聚糖酶的二级结构和三级结构,结果表明,Microbacterium sp.OU01壳聚糖酶Glu51极有可能是维持酶的催化活力的必需氨基酸,它的突变可能导致酶蛋白二级结构组件及氢键网络的改变,从而导致酶活力的丧失.

关键词：壳聚糖酶、定点突变、比活力、必需氨基酸

所属期刊栏目：37

分类号：TS201.3(食品工业)

资助基金：碳谷-江苏海资院海洋先进材料联合研究中心开放课题TG-201402;江苏省科技项目产学研联合创新资金——前瞻性联合研究项目BY2014085;连云港市中小企业技术创新项目CK1419.

在线出版日期：2016-09-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：167-171,177