粘质沙雷氏菌PL-06磷脂酶A1在大肠杆菌中的分泌表达及其条件优化

摘要：

克隆粘质沙雷氏菌PL-06磷脂酶A1基因plaA,与载体pET-22b(+)连接构建重组质粒pET-22b(+)-plaA,并将重组质粒导入受体菌E.coli BL21(DE3)中表达,构建得到重组菌AP22,IPTG诱导表达目的蛋白后将培养基蛋白进行SDS-PAGE分析显示:重组蛋白以可溶性蛋白的形式大量存在于发酵液中,分子质量约35 ku,与预期蛋白大小一致.以磷脂酶A1酶活为指标,在单因素实验的基础之上,通过正交实验得到摇瓶培养最佳条件为:氨苄青霉素终浓度30μg/mL,IPTG加量0.25 mmol/L,温度为34℃,OD耐值为0.3,诱导时间4h.在此条件下重组胞外磷脂酶A1酶活可高达8.6 U/mL,比优化前提高了43.3％.

关键词：磷脂酶A1、粘质沙雷氏菌、分泌表达、优化

所属期刊栏目：36

分类号：TS201.2(食品工业)

资助基金：国家自然科学基金C200504;安徽省自然科学基金11040606M81.

在线出版日期：2015-09-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：193-197,202