抗克百威单链抗体的可溶性表达载体的构建及鉴定

摘要：

为构建克百威(carbofuran,CBF)单链抗体(scFv)可溶性表达载体,实现其在大肠杆菌中的表达.以pCANTAB5E-scFv质粒为模板扩增CBF的重链(VH)及轻链(VL)片段,通过引物设计引入由15个氨基酸组成的连接肽(Gly4Ser)3,经重叠延伸拼接重链及轻链片段,并通过PCR扩增得到scFv基因,再与载体pLIP6/GN连接,转化大肠杆菌BI21,阳性克隆质粒经PCR鉴定并测序.重组菌经0.6 μmol/L异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)及低温诱导表达重组单链抗体,并通过SDS-PAGE和Western blotting对其鉴定.采用ELISA法检测重组单链抗体的抗原结合活性.结果表明重组质粒pLIP6/GN-scFv含有插入片段,scFv与碱性磷酸酶(AP)相连得到重组蛋白的分子量接近78 ku,可被游离的CBF竞争性抑制,IC50值为26.80 ng/mL.这说明成功构建了重组质粒pLIP6/GN-scFv并实现了其在大肠杆菌中的可溶性表达,为研究其在免疫分析方法中的应用奠定了基础.

关键词：克百威、重组单链抗体、可溶性表达

所属期刊栏目：36

分类号：TS201.1(食品工业)

在线出版日期：2015-09-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：178-182