草鱼肝胰中CPIs初步分离鉴定及其活性测定

摘要：

首先比较了偶氮酪蛋白(Azocasein)法和荧光合成肽底物法,在监测草鱼肝胰半胱氨酸蛋白酶抑制剂CPIs(cysteine proteinase inhibitors)活性时的适用性.进而通过凝胶过滤高效液相色谱法、反相酶谱和免疫印迹法,对草鱼肝胰中CPIs的分子量分布及可能的家族类型进行定性鉴定.结果表明在粗提液中加入丝氨酸蛋白酶不可逆抑制剂(40 mmol/L PMSF或0.4 mmol/L Pefabloc SC),或经90℃加热5 min,仅荧光合成肽底物法可准确地监测到CPIs活性的变化.液相色谱结果显示,草鱼肝胰中存在分子量(98、26、12、5～1 ku)不同的CPIs活性部分.但反相酶谱法仅能够判断其中大于20 ku的CPIs.而免疫印迹法证明存在约12 ku的Cystatin(家族Ⅱ)类型CPIs,发现小于12 ku的显色条带,可能是该蛋白降解形成的低分子量的活性片段.

关键词：草鱼肝胰、半胱氨酸蛋白酶抑制因子、活性测定、分子量分布、分离鉴定

所属期刊栏目：36

分类号：TS254.1(食品工业)

资助基金：国家自然科学基金青年科学基金项目31101249;四川省科技支撑计划项目2014NZ0003.

在线出版日期：2015-09-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：118-123