实时荧光定量PCR技术快速检测志贺氏菌

摘要：

目的 建立实时荧光定量PCR法快速检测志贺氏菌.方法 提取志贺氏菌基因组为模板扩增virA基因片段,将目的片段连接至pMD19-T载体得到重组质粒,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,验证所得到的重组质粒,以紫外分光光度计测量重组质粒吸光度值A260,并换算为质粒拷贝数后作梯度稀释得到不同浓度的质粒标准品;进行荧光定量PCR分析并通过特异性、灵敏性实验以验证该方法的可行性.结果 重组质粒标准品浓度在103～108 copies/μL范围内线性关系良好(r2＞0.99),实时荧光定量PCR检测志贺氏菌时出现良好的扩增曲线,鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均未出现扩增曲线.志贺氏菌的检出限为100 CFU/mL.结论 本方法便捷、高效、可靠,可用于志贺氏菌的快速定性定量检测.

关键词：志贺氏菌、实时荧光定量PCR、标准曲线、特异性、灵敏性

所属期刊栏目：10

分类号：S5 ;R73

资助基金：安徽省十三五医疗卫生重点专科建设项目皖卫科教[2017]30号;2018年度安徽省卫计委科研计划项目2018YK008

在线出版日期：2020-01-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：8037-8041