重组蛋白A亲和填料的制备及其性能评价

摘要：

为了获得一种优良的抗体纯化介质,制备了重组金黄色葡萄球菌蛋白A( rProtein A)亲和填料,并考察了所制备的亲和填料的纯化性能.利用自行构建的rProtein A工程菌,经诱导表达、纯化获得rProtein A纯品,将其偶联到经环氧氯丙烷活化的Sepharose 4 Fast Flow凝胶上,得到rProtein A亲和填料,并使用兔抗尿酸氧化酶抗体对该填料的性能进行验证.结果显示,在自制的rProtein A亲和填料上rProteinA浓度为1.5×10-4 mol/L.采用Scatchard模型分析,得到其解离常数和最大表观吸附量分别为2.28×10-7 mol/L和20.697 g/L,说明制得的rProtein A亲和填料对抗体有很好的结合能力.将该填料于0.1 mol/L NaOH溶液中浸泡1h,其色谱性能未见变化.将该填料用于纯化兔抗体,湿胶结合抗体量可达19 mg/mL；一步柱色谱即可得到电泳纯度的抗体样品,回收率高于96％.本研究为rProteinA亲和填料的国产化奠定了基础.

关键词：重组金黄色葡萄球菌蛋白A、亲和填料、制备、纯化、抗体

所属期刊栏目：30

分类号：O658(分析化学)

资助基金：国家重大新药刨制专项2009ZX09401-006

在线出版日期：2012-05-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：86-90