利用荧光PCR技术对Crispr/Cas9敲除microRNA 505的小鼠进行鉴定

摘要：

利用荧光PCR技术对Crispr/Cas9系统敲除的microRNA 505小鼠进行鉴定,能快速检测出敲除小鼠的基因型,有效加快敲除小鼠基因功能验证的进程.首先,在Crispr/Cas9系统敲除的基因位点区域设计PCR引物,并在上游引物的5'端使用羟基荧光素(5-carboxyfluorescein,FAM)荧光修饰.模板经过PCR的扩增后,将PCR产物与已知片段大小的6-羧基-X-罗丹明琥珀酰亚胺酯(6-carboxy-X-rhodamine,ROX)混合,在377测序仪上通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离.随后,根据相对分子质量内标法计算出PCR产物大小,从而达到鉴定小鼠基因型的目的.将上述荧光PCR技术应用于实践发现,两只奠基鼠、16只F1代小鼠以及26只F2代小鼠都能得到准确的鉴定,其中包括microRNA 505基因区段被敲除了17 bp和23 bp.因此,利用荧光PCR技术可以快速、准确地鉴定Crispr/Cas9敲除小鼠.

关键词：Crispr/Cas9系统、荧光PCR技术、基因型鉴定、microRNA 505敲除小鼠

所属期刊栏目：20

分类号：Q38(动物遗传学)

资助基金：国家自然科学基金;上海市科委关键项目;上海市科委关键项目

在线出版日期：2016-09-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：296-300,308