焦磷酸测序法检测OCT4启动子在大鼠骨髓源性肝干细胞分化中的甲基化变化

摘要：

骨髓间充质干细胞具有分化成为肝细胞的潜能已得到证实,但其分化的调控机理还不完全清楚.通过检测大鼠骨髓源性肝干细胞(rat bone marrow-derived liver stem cells,RBMLSCs)诱导分化为肝细胞过程中OCT4启动子甲基化的变化,来探讨启动子甲基化调控细胞分化的机制.RBMLSCs用25 μg/L重组人肝细胞生长因子和0.1 nmol/L地塞米松进行诱导,在诱导之后不同时间点(0d,7d,14d)提取细胞的DNA及RNA.用荧光定量PCR法检测白蛋白(albumin,Alb)和OCT4的mRNA表达水平,应用焦磷酸测序法定量检测OCT4基因的启动子中4个CpG位点的甲基化变化.结果表明:在RBMLSCs分化过程中,Alb mRNA持续增高(P＜0.05),但OCT4 mRNA表达在7d及14d明显减少(P＜0.005);同时OCT4启动子上游的CpG1-2-3甲基化频率显著上升(P＜0.001),但CpG4甲基化无明显变化.这些结果说明OCT4启动子高甲基化可能导致其mRNA表达减少,RBMLSCs多能性消失,但CpG4并不参与这一分化调控过程.

关键词：大鼠骨髓源性肝干细胞、OCT4、启动子甲基化、焦磷酸测序

所属期刊栏目：20

分类号：Q344(遗传学分支学科)

资助基金：广东省科技计划;国家卫计委重点临床专科资助项目

在线出版日期：2016-06-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：113-118