金针菇谷氨酸脱氢酶基因的克隆及原核表达

摘要：

利用简并引物和RT-PCR方法从金针菇(Flammulina velutipes)幼嫩子实体中克隆获得Fv GDH全长cDNA序列.构建入门载体pGWC-Fv GDH,利用Gateway克隆技术的LR反应构建原核重组表达载体pDEST17-FvGDH,转化大肠杆菌BL21 (DE3).通过IPTG法诱导表达融合蛋白并进行表达条件优化.SDS-PAGE蛋白电泳分析表明,融合蛋白相对分子质量约为53 kD,与预测的一致.最佳表达条件为温度30℃、IPTG浓度0.4mmol/L、诱导4h.融合蛋白表达量较高,实现了FvG DH的高效表达,并利用Western blotting对其特异性进行鉴定.FvGDH基因高效原核表达体系的成功建立,为进一步研究FvGDH的酶促动力学奠定了基础.

关键词：FvGDH、Gateway克隆、原核表达、SDS-PAGE、Western blotting

所属期刊栏目：17

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：转基因生物新品种培育科技重大专项;国家自然科学基金;湖南省自然科学基金;中央高校基本科研业务费专项湖南大学重大前期培育项目

在线出版日期：2013-07-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：230-237