CYP3A4基因原核表达质粒构建与诱导表达

摘要：

以质粒pCWNF14为模板,采用PCR技术扩增出CYP3A4基因,并将其接入pET-22b(+)、pET-28b(+)和pET-32a(+)载体中,经PCR测序鉴定后,转化Rosetta(DE3)2pLysS细菌,并用IPTG诱导表达.采用考马斯亮蓝染色的方法检测重组蛋白表达,3个表达重组质粒中,只有pET-32a(+)-CYP3A4可以表达目的蛋白;在低浓度IPTG(50 μmol/L)诱导6 h,所表达的CYP3A4蛋白约占细菌总蛋白的40%,且该蛋白不溶于8 mol/L的尿素,而溶于去污剂10 mmol/L 3-((3-Cholamidopropyl)dimethylammonio propanesulfonic acid(CHAPS))和0.3% lauroyl sarcosine(SKL).成功地使CYP3A4基因在原核系统中高效表达.

关键词：CYP3A4、大肠肝菌、表达

所属期刊栏目：11

分类号：Q75(分子遗传学)

资助基金：中国博士后科学基金;国家自然科学基金

在线出版日期：2007-05-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：28-32