肝癌细胞MAT2A基因小干扰RNA靶位筛选体系的建立

摘要：

目的:构建MAT2A基因的小干扰RNA(siRNA)快速筛选体系,筛选出有效的小干扰RNA.方法:首先构建能产生MAT2A基因小干扰RNA的质粒表达载体,细胞内转录合成4条小干扰RNA;然后构建MAT2A基因与荧光素酶报告基因(luciferase)的融合质粒表达载体plucF-MAT2A采用脂质体转染法将plucF-MAT2A与产生siRNA的质粒共转染293T细胞,定量测量荧光素酶活性,构建MAT2A基因的小干扰RNA筛选体系,初步筛选出抑制荧光素酶表达的有效siRNA;然后将有效的siRNA转染Bel-7402肝癌细胞,半定量RT-PCR检测MAT2A mRNA表达,并检测转染后肝癌细胞MAT的活性,进一步证实siRNA对MAT2A表达的抑制效果.结果:所合成的4条小干扰RNA中有2条抑制荧光素酶表达,抑制效率分别为81%和89%,并特异性抑制肝癌细胞MAT2A mRNA表达,降低了肝癌细胞中MAT活性.结论:通过荧光素酶报告体系来检测siRNA有效性的方法为RNAi研究提供了一个快速有效地筛选小干扰RNA的途径.

关键词：siRNA、肝癌、MAT2A

所属期刊栏目：18

分类号：R735.7(肿瘤学)

在线出版日期：2005-12-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：538-541