rAAV介导的HIF-1α-RNAi载体的构建

摘要：

目的 构建以rAAV为载体、GFP为报告基因和HIF-1α为靶基因的RNA干扰.方法 提取人基因组DNA,PCR扩增人H1启动子,插入载体质粒pAAV-hrGFP的CMV启动子前方Mlu Ⅰ单克隆位点,构建成pH1-hrGFP;根据HIF-1α的有效干扰位点,合成两条分别为58bp互补的寡核苷酸链,通过体外退火形成双链,然后插入pH1-hrGFP的H1启动子尾部Xba Ⅰ和Mun Ⅰ位点,构建成pH1-siRNA;将载体质粒pH1-siRNA和辅助质粒pRC、pHelper共转染HEK293细胞,反复冻溶后收集上清,浓缩纯化,电镜观察病毒形态和ELISA法测定病毒滴度.结果 构建的pH1-hrGFP质粒,通过酶切、PCR检测以及测序鉴定均正确;构建的pH1-siRNA,通过酶切及测序鉴定也正确;包装的rAAV经电镜检测形态正常,滴度达1.2×1012v.p/mL.结论 成功构建了rAAV介导的HIF-1α-RNAi表达载体,为今后的体内外试验奠定了基础.

关键词：重组腺相关病毒、缺氧诱导因子、小干扰RNA

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分类号：R73-3(肿瘤学)

资助基金：天津市科技发展计划05YFSYSF01300

在线出版日期：2007-07-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：83-85,94