维甲酸联合Purmorphamine诱导人脐带间充质干细胞向运动神经元分化的研究
目的:探讨单独和联合应用维甲酸( retinoic acid,RA)与purmorphamine(2,6,9-三取代嘌呤化合物,PM)对人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs)向运动神经元分化的影响,为其进一步临床应用提供实验依据.方法:用双酶消化法提取纯化hUCMSCs,取传至第3代的hUCMSCs,流式细胞仪检测表面抗原CD29、CD31、CD34、CD44的表达情况.根据加入不同诱导剂分4组:空白对照组;RA组(加入0.5 μg/ml RA);PM组(加入1μg/ml PM);RA+ PM组(加入0.5 μg/ml RA和1μg/ml PM).细胞诱导后第20d,观察细胞形态的变化;采用免疫细胞化学方法检测Nestin、β-tubulin-Ⅲ、Hb9、ChAT的表达情况,比较各组细胞阳性表达的比例.RA+ PM组细胞诱导5、10、15、20、25 d后收集细胞,检测细胞内Ach的含量.结果:流式细胞仪检测结果显示,CD29、CD44高表达,CD31阴性,CD34不表达.空白对照组和PM组细胞诱导后形态变化不明显,Nestin和β-tubulin-Ⅲ阳性表达率均很低,两者之间无差别.RA组和RA+ PM组的诱导后细胞具有典型的神经元样形态;且Nestin和β-tubulin-Ⅲ阳性表达率比其他两组高,有显著性差异(P＜0.01).4组中只有RA+ PM组细胞诱导后出现Hb9表达阳性,其他各组均无Hb9表达.RA+ PM组ChAT高表达,RA组仅少量表达.从第15 d起,RA+ PM组细胞可检测到Ach,其含量随着诱导时间的延长逐渐增加.结论:RA能促进hUCMSCs向神经元分化,单独使用PM并没有明显效果,而RA联合PM能显著促进hUCMSCs向运动神经元分化.
人脐带间充质干细胞、运动神经元、维甲酸、purmorphamine、诱导
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R329(人体形态学)
辽宁省自然科学基金20102138;辽宁医学院青年科技启动基金Y2010Z004
2012-03-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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