基于全细胞催化的蟾蜍二烯内酯前体化合物生物合成研究

摘要：

目的:将胆固醇生物转化成7α-羟基-4-胆甾烯-3-酮.方法:PCR扩增中华大蟾蜍来源的3β羟基类固醇脱氢酶基因(Bg-HSD3B7)、细胞色素P450还原酶基因(Bg-CPR)、大鼠来源的细胞色素P450酶基因(Rn-CYP7A1),生物信息学网站ExPASy、TMHMM预测理化性质,采用不同的构建组合方式构建工程菌;以胆固醇为底物进行全细胞催化,高效液相色谱检测是否产生7-α羟基胆固醇中间产物和7α-羟基-4-胆甾烯-3-酮终产物.结果:克隆并以单顺反子方式构建到pETM6载体,获得带有3个基因Rn-CYP7A1、Bg-CPR、Bg-HSD3B7的大肠杆菌工程菌BL21(DE3),该工程菌可以全细胞催化方式将胆固醇转化生成7α-羟基-4-胆甾烯-3-酮,且没有中间产物.结论:克隆得到中华大蟾蜍来源的Bg-HSD3B7基因、Bg-CPR基因、大鼠来源的Rn-CYP7A1基因,构建了具有全细胞催化功能的工程大肠杆菌,可以催化胆固醇转化生成7α-羟基-4-胆甾烯-3-酮.

关键词：中华大蟾蜍、胆固醇、工程菌、3β羟基类固醇脱氢酶、细胞色素P450还原酶

所属期刊栏目：36

分类号：R927.2;O657.3;R284.1

资助基金：上海市中央引导地方科技发展基金项目YDZX20223100001004

在线出版日期：2022-11-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：39-45