佛波酯诱导C2C12肌管自噬及corylifol A的保护作用研究

摘要：

目的:探索佛波酯(PMA)诱导C2C12肌管自噬的作用机制并考察补骨脂成分次苷酸查尔酮(CYA)对肌管的保护作用.方法:构建能够准确分析细胞自噬状态的mRFP-GFP-LC3B双荧光C2C12成肌细胞,将已分化C2C12细胞分为对照组、PMA组(1 μmol/L)、自噬阳性对照组(饥饿组)、CYA组(10 μmol/L)及PMA+CYA组.处理时间为48 h.Cytation 5测定细胞在不同波长下的荧光强度,Western blot检测自噬相关蛋白Beclin-1及微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)的表达水平,qPCR技术检测蛋白激酶C(PKC)-ε、PKC-β,PKC-θ和缺氧诱导因子-2α(HIF-2α)的表达水平.用海马能量代谢分析仪(Seahorse XFe 24分析仪)检测细胞线粒体呼吸能力.结果:①与对照组比较,PMA(1 μmol/L)可使C2C12肌管的黄色荧光斑点显著增加,红色荧光信号强度也显著增强(P＜0.01),即自噬及自噬溶酶体均增加.而CYA(10 μmol/L)可以显著降低PMA诱导的C2C12肌管黄色荧光斑点和红色荧光信号强度(P＜0.01).②与对照组比较,PMA可以上调Beclin-1和LC3B U蛋白表达水平(P＜0.05,P＜0.01);与PMA组比较,PMA+CYA组可以降低自噬相关蛋白Beclin-1及LC3BU的蛋白表达水平(P＜0.05,P＜0.01).③与对照组比较,PMA显著降低C2C12肌管的基础呼吸、最大呼吸和ATP的生成(P＜0.01).④与对照组比较,PMA组可以显著上调PKC-ε、PKC-β、PKC-θ和HIF-2α基因表达水平(P＜0.05,P＜0.01).结论:PMA可能通过激活C2C12肌管的PKC通路来抑制细胞线粒体呼吸,促进HIF-2α的表达,HIF-2α上调自噬相关蛋白Beclin-1和LC3B Ⅱ的表达,从而诱导C2C12肌管自噬.CYA则可能通过下调Beclin-1和LC3BⅡ的蛋白表达来保护肌管对抗PMA诱导的自噬.

关键词：佛波酯、次苷酸查尔酮、自噬、C2C12肌管

所属期刊栏目：36

分类号：R730.261;R392.12;R285.5

资助基金：国家自然科学基金81873056

在线出版日期：2022-07-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：49-58