模拟步行压力下牛蒡子苷元对软骨细胞的保护机制研究

摘要：

目的:探讨模拟步行压力对软骨细胞的作用及压力负荷下牛蒡子苷元(ARG)对软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白(ColⅡ)、SRY相关高迁移率族盒蛋白转录因子9(SOX9)、瞬时受体电位香草素亚家族4(TRPV4)、基质金属蛋白酶(MMPs)的影响.方法:分离并培养小鼠原代软骨细胞,制备3D培养软骨细胞水凝胶.将制备的水凝胶分为空白组、模型组、ARG组和抑制剂组.空白组不进行压力干预,使用常规培养基换液.其他3组均给予模拟步行压力(正弦波,1 Hz,20 kPa)干预2h.压力干预同时,ARG组和抑制剂组分别给予10 μmol/L ARG和10 nmol/L TRPV4抑制剂GSK2193874.收集干预后各组水凝胶提取的软骨细胞,免疫荧光染色检测ColⅡ蛋白表达,PCR检测ColⅡ、SOX9、TRPV4、MMP9、MMP13的mRNA表达水平,Western blot检测ColⅡ、SOX9、TRPV4的蛋白表达水平.结果:①免疫荧光染色观察显示,与空白组相比,模型组ColⅡ蛋白表达较少;与模型组相比,ARG组和抑制剂组ColⅡ蛋白表达明显增多.②与空白组相比,模型组ColⅡ、SOX9、TRPV4的mRNA表达量显著降低(P＜0.01),MMP9和MMP13的mRNA表达量均显著增高(P＜0.01);与模型组相比,ARG组和抑制剂组ColⅡ、SOX9、TRPV4的mRNA表达量显著增高(P＜0.01),MMP9和MMP13的mRNA表达量均显著降低(P＜0.01).(③与空白组相比,模型组ColⅡ和SOX9蛋白表达水平显著降低(P＜0.01),TRPV4蛋白表达无明显变化;与模型组相比,ARG组和抑制剂组ColⅡ和SOX9蛋白表达水平显著增高(P＜0.01),TRPV4蛋白表达水平显著降低(P＜0.01).结论:模拟步行压力可导致软骨细胞发生趋向予软骨退化的代谢反应.模拟步行压力下,ARG和TRPV4抑制剂对软骨细胞具有保护作用,其机制可能与上调ColⅡ、SOX9表达,抑制TRPV4、MMP9和MMP13的表达有关.

关键词：牛蒡子苷元、步行压力、瞬时受体电位香草素亚家族4、Ⅱ型胶原蛋白、SRY相关高迁移率族盒蛋白转录因子9、软骨细胞

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资助基金：国家自然科学基金资助项目;上海市科委科研计划项目;上海市进一步加快中医药事业发展三年行动计划项目[ZY2018-2020-CCCX-2001-06;上海中医药大学预算内项目;上海中医药大学研究生创新能力项目

在线出版日期：2020-11-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：57-63