10.16306/j.1008-861x.2020.02.013
护肝片对ANIT诱导的胆汁淤积大鼠的保肝利胆作用及其机制探讨
目的:探讨护肝片对α-萘异硫氰酸酯(ANIT)诱导的胆汁淤积大鼠的保肝利胆作用及其可能机制.方法:SD大鼠120只,雌雄各半,随机分为对照组、模型组、熊去氧胆酸(UDCA,30 mg/kg)组及护肝片低、中、高剂量(5、10、20 mg/kg)组,每组20只.除对照组外,其他各组大鼠灌胃给予40 mg/kg ANIT油溶液,连续14 d,诱导胆汁淤积模型.第15天起,各组灌胃给予相应药物干预,连续7d.末次给药后,取血,分离肝脏组织.生化分析仪检测血清总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、总胆汁酸(TBA)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)水平;HE染色后光镜下观察肝组织形态学变化;PCR检测肝组织钠离子依赖型牛磺胆酸协同转运蛋白(Ntcp)、胆盐外排泵(Bsep)、多药耐药相关蛋白2(Mrp2)、多药耐药相关蛋白3(Mrp3)的mRNA表达;ELISA和免疫组化检测肝组织Ntcp 、Bsep、Mrp2、Mrp3的蛋白表达.结果:①与对照组相比,模型组TBIL、DBIL、TBA、ALT、AST、ALP水平显著升高(P<0.05);与模型组相比,UDCA组及护肝片各剂量组TBIL、DBIL、TBA、ALT、AST、ALP水平明显降低(P<0.05).护肝片对血清生化指标的影响呈剂量依赖性(P<0.05),高剂量组最为显著.②与对照组相比,模型组大鼠肝细胞和胆管上皮细胞坏死,且伴有大量炎症细胞浸润;与模型组相比,各药物治疗组的肝损伤程度均有不同程度减轻,UDCA组及护肝片高剂量组作用更为显著.③与对照组相比,模型组大鼠肝脏Ntcp、Bsep、Mrp2的mRNA表达水平显著降低(P<0.05),而Mrp3 mRNA表达水平显著升高(P<0.05);与模型组相比,UDCA组及护肝片各剂量组Ntcp、Bsep、Mrp2的mRNA表达水平明显升高(P<0.05),Mrp3 mRNA表达水平明显降低(P<0.05).护肝片高剂量组Ntcp、Bsep、Mrp2的mRNA表达水平高于低、中剂量组(P<0.05),Mrp3 mRNA表达水平低于低、中剂量组(P<0.05).④ELISA检测蛋白表达含量,免疫组化检测蛋白阳性表达并进行综合评分.结果显示,与对照组相比,模型组大鼠肝脏Ntcp、Bsep、Mrp2蛋白表达水平显著降低(P<0.05),Mrp3蛋白表达水平升高(P<0.05);与模型组相比,UDCA组及护肝片各剂量组Ntcp、Bsep、Mrp2蛋白表达水平明显升高(P<0.05),Mrp3蛋白表达水平明显降低(P<0.05).护肝片高剂量组Ntcp、Bsep、Mrp2蛋白表达水平高于低、中剂量组(P<0.05),Mrp3蛋白表达水平低于低、中剂量组(P<0.05).结论:护肝片对ANIT诱导的胆汁淤积大鼠具有保肝利胆效应,且呈剂量依赖性,其作用机制与上调肝脏Ntcp、Bsep、Mrp2表达,降低Mrp3表达有关.
护肝片、胆汁淤积、α-萘异硫氰酸酯、转运体、大鼠
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上海市科委科研计划项目;上海中医药大学预算内项目
2020-05-11(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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