软坚清脉颗粒含药血清对血管内皮细胞缺氧损伤的保护作用

摘要：

目的:探讨软坚清脉颗粒含药血清对血管内皮细胞缺氧损伤的保护作用.方法:SD大鼠随机分为对照组和软坚清脉颗粒低、中、高剂量组,分别灌胃给予0.9％NaCl溶液和0.275 g·kg-1·d-1、0.550 g·kg-1·d-1、1.100 g·kg-1·d-1软坚清脉颗粒剂溶液,每天2次,连续灌胃10 d.末次给药后心脏采血,制备含药血清.人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)分为空白组、模型组和软坚清脉颗粒低、中、高剂量组.空白组细胞加入不含大鼠血清的完全培养基,并置于正常环境下(21％O2)培养;模型组细胞加入制备的对照组含药血清;软坚清脉颗粒各剂量组细胞分别加入制备的相应组别的含药血清.除空白组外,其他各组置于含95％N2 +5％CO2混合气体的培养箱中,诱导缺氧损伤模型.MTT法检测细胞活力;Hochest33342和Annexin V-FITC/PI染色检测细胞凋亡;Rho123染色后流式细胞仪检测线粒体膜电位(MMP);PCR和Western blot分别检测细胞中TL1A和Caspase-3的mRNA和蛋白表达水平.结果:①缺氧诱导48 h后,与空白组相比,模型组HUVECs细胞活力显著降低(P＜0.01);与模型组相比,软坚清脉颗粒中、高剂量组的细胞活力显著升高(P＜0.01),且中、高剂量组的细胞活力明显高于低剂量组(P＜0.01).②缺氧诱导24h后,模型组细胞核固缩碎裂并出现凋亡小体,细胞凋亡率较空白组明显升高(P＜0.01);软坚清脉颗粒各剂量组的核固缩和凋亡小体明显减少,细胞凋亡率较模型组均显著降低(P＜0.05,P＜0.01),且中、高剂量组的细胞凋亡率明显低于低剂量组(P＜0.01).③与空白组相比,模型组细胞MMP显著降低(P＜0.01);与模型组相比,软坚清脉颗粒各剂量组细胞MMP显著升高(P＜0.05,P＜0.01),且中、高剂量组细胞的MMP明显高于低剂量组(P＜0.01).④与空白组相比,模型组细胞TL1A和Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平显著升高(P＜0.01);与模型组相比,软坚清脉颗粒各剂量组细胞TL1A和Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平显著降低(P＜0.05,P＜0.01),且中、高剂量组细胞TL1A和Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平明显低于低剂量组(P＜0.01).结论:软坚清脉颗粒含药血清可通过稳定MMP抑制缺氧诱导的HUVECs细胞凋亡,其作用机制可能与抑制TL1A和Caspase-3表达有关.

关键词：软坚清脉颗粒、含药血清、动脉硬化闭塞、缺氧、血管内皮细胞、凋亡

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资助基金：国家重大新药创制科技重大专项项目SQ2018ZX090204;上海市科委科技计划项目18401932900

在线出版日期：2019-05-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：73-79