10.16306/j.1008-861x.2019.01.012
阿霉素诱导的斑马鱼心肌损伤模型研究
目的:建立阿霉素诱导的斑马鱼心肌损伤模型,为心血管疾病药物筛选提供模型参考.方法:取转基因(cmlc2:EGFP)系心脏特异表达绿色荧光斑马鱼培育繁殖.待斑马鱼胚胎生长36 h时,分成对照组及阿霉素低、中、高浓度组(20 μg/ml、30 μg/ml、40 μg/ml),每组40条.分别用E3胚胎培养液及相应浓度的阿霉素干预.干预24 h和48 h后,观察各组斑马鱼胚胎的生存情况,计算生存率.显微镜下观察各组斑马鱼胚胎的表型,测量并记录静脉窦和动脉球(SV-BA)之间的距离.制备冰冻切片并行HE染色,观察各组斑马鱼心脏组织的形态学变化;显微镜下解剖心脏,进行DAPI和TUNEL染色,激光共聚焦显微镜扫描观察心肌细胞的凋亡情况.结果:①与对照组相比,30 μg/ml及40μg/ml阿霉素干预24h、48 h后,斑马鱼胚胎生存率显著降低,且呈浓度和时间依赖性.②正常斑马鱼活动力强,无心包水肿;不同浓度的阿霉素干预48 h后,斑马鱼活动力受到抑制,心房、心室逐渐变大,出现不同程度的心包水肿,其中阿霉素40 μg/ml组表型最为明显.③与对照组相比,阿霉素各浓度组斑马鱼的SV-BA距离显著增大(P<0.01),其中阿霉素40μg/ml组斑马鱼的SV-BA距离较20 μg/ml组和30 μg/ml组显著增大(P<0.05,P<0.01).④HE染色显示,阿霉素40μg/ml组斑马鱼出现张口呼吸,心脏明显变大,心脏结构紊乱,有红细胞溢出.⑤DAPI和TUNEL染色显示,阿霉素40μg/ml组斑马鱼心脏明显变大,细胞数目减少且较稀疏,细胞核增大,凋亡细胞增多.结论:表明阿霉素诱导的斑马鱼心肌损伤模型成功建立.阿霉素对斑马鱼胚胎的心肌损伤作用呈时间和浓度依赖性,其机制可能与增加心肌细胞凋亡有关.
斑马鱼、阿霉素、心肌损伤、模型
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国家自然科学基金资助项目81328025,81873264;上海市科委科研计划项目17401901600
2019-03-20(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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