CRISPR/Cas9系统介导GFP在兔H11位点的定点整合研究

摘要：

目的 家兔是一种重要的模式动物,然而目前家兔中缺乏外源基因定点整合的相关技术.方法 为了在兔胚胎成纤维细胞水平建立起成熟的H11位点定点整合平台,试验根据文献报道的人和小鼠的H11位点鉴定出家兔的H11位点,并使用CRISPR/Cas9系统和同源重组技术,设计了两对针对H11位点的sgRNA和左右同源臂,构建敲除载体和打靶载体.将两种载体共同转染进兔胚胎成纤维细胞中,在共转染的细胞基因组中依托嘌呤霉素筛选检测外源基因整合.结果 在共转染的兔胚胎成纤维细胞中检测到外源基因插入,并且在敲入后成功表达外源基因.结论 该实验依赖于CRISPR/Cas9技术和同源重组技术在细胞水平上创建高效的位点特异性整合系统,为未来转基因兔的安全和有效制备奠定了基础.

关键词：CRISPR/Cas9、定点敲入、兔胚胎成纤维细胞、H11位点

所属期刊栏目：37

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：新疆生产建设兵团科技创新中青年领军人才项目2016BC001,2017CB003;石河子大学青年科技创新人才项目CXRC201603

在线出版日期：2020-01-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：580-588