盘羊杂交羊SP-A基因克隆与真核表达

摘要：

目的 为了对盘羊杂交羊肺表面活性物质相关蛋白A(Pulmonary surfactant-associated protein A,SP-A)基因进行克隆和真核表达.方法 采集盘羊杂交羊肺组织,提取总RNA,采用RT-PCR的方法克隆SP-A基因的ORF序列,测序正确后将其亚克隆到pPIC9K载体中构建pPIC9K-SP-A真核表达质粒,再将该质粒电转入毕赤酵母GS115中并用甲醇诱导进行真核表达,最后用SDS-PAGE和western blot检测鉴定目的蛋白.结果 扩增出的基因片段经测序比对后与SP-A基因的ORF序列一致,构建的真核表达质粒pPIC9K-SP-A经双酶切和测序鉴定成功,真核表达产物用SDS-PAGE分析,可见大小为27.33 kD的目的条带,western blot鉴定也可见1条27.33 kD的目的蛋白条带.结论 本研究成功克隆了盘羊杂交羊SP-A基因的ORF序列并对其进行了真核表达,为后续研究SP-A蛋白的结构和功能奠定了基础.

关键词：盘羊杂交羊、肺表面活性物质相关蛋白A、克隆、真核表达

所属期刊栏目：36

分类号：S826(家畜)

资助基金：国家自然科学基金项目31460686

在线出版日期：2018-12-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：309-314