布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统蛋白基因VceA的原核表达、纯化及功能分析

摘要：

本研究对布鲁氏菌分泌蛋白VceA基因进行了原核表达与纯化,并分析其反应原性,致炎特性和分子特性.应用PCR技术从布鲁氏菌2308基因组中扩增VceA基因,亚克隆至PMD19-T载体后,进行测序,构建重组表达质粒PGEX-4T-1-VceA,然后转化至E.coli BL21 (DE3)表达菌中,IPTG诱导表达后经SDS-PAGE分析,Western Blot检测其反应原性;用重组蛋白作用于细胞,检测炎症相关细胞因子的分泌量;并对该蛋白进行生物信息学分析.结果显示:PCR扩增出VceA基因,SDS-PAGE显示纯化的VceA融合蛋白大约在37 kD处,Western Blot也出现了杂交带.细胞实验表明重组蛋白刺激细胞后产生的IL-18,IL-1β,TGF-β 1的含量均显著高于BSA对照组(P＜0.05).生物信息学分析显示,该蛋白无跨膜区结构,存在信号肽,属于分泌型蛋白,二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主,并利用Phyre2软件成功构建了该蛋白的三维模型.结果表明,成功克隆并表达了布鲁氏菌VceA蛋白,该蛋白具有良好的反应原性,并具有致炎作用.这为进一步研究布鲁氏菌分泌蛋白的致病机制奠定了基础.

关键词：布鲁氏菌、Ⅳ型分泌系统、VceA基因、细胞因子

所属期刊栏目：35

分类号：S852.61(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金项目31402166;国际科技合作项目2013BC005

在线出版日期：2017-06-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：83-88