Ubiquitin真核表达载体构建及在293T细胞中的表达

摘要：

为构建泛素分子pcDNA3.1-Myc-ubiquitin真核表达载体,实现其在293T细胞中表达.采用人工合成ubiquitin基因序列并加入c-Myc标签序列及EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ酶切位点的方法,克隆至pcDNA3.1真核表达载体中.重组表达质粒经PCR和测序鉴定正确后,脂质体法转染入293T细胞.Western blot和间接免疫荧光法分析重组质粒在细胞中的蛋白表达及定位情况.菌落PCR及测序等分析结果显示:成功构建了pcDNA3.l-Myc-ubiquitin真核表达载体.免疫荧光和Western-Blot结果显示:Myc-ubiquitin重组表达质粒在293T细胞中获得高效表达且蛋白定位于胞浆.由此可知,成功构建pcDNA3.1-Myc-ubiquitin融合表达载体并在293T细胞中高效表达,为课题组进一步探讨与泛素化修饰相关的neuritin的作用机制及功能奠定基础.

关键词：Ubiquitin、Western blot、亚细胞定位

所属期刊栏目：32

分类号：R346(人体生物化学、分子生物学)

资助基金：国家自然科学基金项目31060136

在线出版日期：2015-01-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：449-453