小麦SBEⅡb基因的克隆及其与PDS基因串联VIGS载体的构建

摘要：

为探讨以PDS基因为指示基因利用VIGS技术研究小麦SBEⅡb基因的功能，本研究拟构建小麦SBEⅡb和PDS的双基因串联VIGS重组载体。根据GeneBank中公布的小麦SBEⅡb（AY740401.1）和PDS（FJ517553.1）基因序列分别设计搭桥引物，利用RT-PCR技术克隆SBEⅡb和PDS基因的特异片段，利用SOE-PCR技术获得双基因融合片段SBEⅡb：PDS。然后以BSMV：γ-PDS为原载体，通过酶切连接，用SBEⅡb：PDS基因片段将原载体中的PDS基因片段进行替换，从而构建BSMV：γ-SBEⅡb：PDS重组载体。结果显示克隆的SBEⅡb和PDS基因片段长分别是181和190 bp，SBEⅡb：PDS片段长是370 bp。序列分析表明：SBEⅡb基因片段与小麦SBEⅡb（AY740401.1）序列同源性为97%；小麦PDS基因片段与PDS（AF155217.2）序列同源性也为97%；酶切鉴定结果表明成功构建BSMV：γ-SBEⅡb：PDS重组载体。本研究构建的BSMV：γ-SBEⅡb：PDS重组载体将在PDS基因的指示下为下一步利用VIGS技术在小麦上研究SBEⅡb基因与小麦淀粉合成的关系奠定了基础。

关键词：小麦、SBEⅡb、PDS、VIGS

分类号：S5120.1(禾谷类作物)

资助基金：国家自然科学基金项目31160279、31260357

在线出版日期：2014-04-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

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