单因子和正交设计法建立分枝杆菌多重PCR体系

摘要：

为了建立一种快速区分鉴定结核与非结核分枝杆菌的多重PCR方法,以分支杆菌属特异基因32 kD,结核分枝杆菌种特异基因MTP40和结核分枝杆菌复合群特异基因IS6110为目标基因,设计合成3对特异性引物,以结核分枝杆菌标准株DNA为模板,通过对PCR反应体系中DNA模板浓度、Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度和TaqDNA聚合酶浓度5个因素的正交设计,以及PCR反应条件中各反应参数的优化,建立了鉴别分支杆菌的多重PCR检测方法,并对该方法的特异性、敏感性进行了验证.结果显示:该方法对结核分枝杆菌标准株H37Ra能扩增出506、396和984 bp,对卡介苗(BCG)能扩增出506和984 bp片段,对禽分支杆菌、胞内分支杆菌、偶发分支杆菌、耻垢分支杆菌、龟分支杆菌能够扩增出506 bp片段,对大肠杆菌等的扩增结果均为阴性.建立的多重PCR敏感度最低可检出6.6×10-6 ng.结论:该方法具有特异性高、敏感性好等特点,可用于奶牛结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌的鉴别诊断.

关键词：分枝杆菌、多重PCR、假阳性、正交设计

所属期刊栏目：31

分类号：S852.61;Q78;R378.91(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家科技支撑计划项目2012BAD43B02

在线出版日期：2014-01-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：449-456