Neuritin siRNA表达载体的构建及对细胞中Neuritin表达的影响

摘要：

为构建neuritin siRNA干扰载体并观察对细胞中neuritin表达水平的影响.采用化学合成法获取靶向neuritin的短发夹寡核苷酸序列,与线性化pGPU6/Neo质粒退火连接.转化后获取的neuritin siRNA经酶切及测序鉴定正确后,转染293T细胞.Western-Blot和间接免疫荧光分析观察构建的neuritin siRNA载体对细胞中neuritin表达及其定位的影响.neuritin siRNA干扰载体经酶切及测序分析的结果显示,目的核苷酸序列成功插入了预计位点且序列完全正确.neuritin siRNA干扰载体转染293T细胞后,Western-Blot检测显示,neuritin siRNA干扰载体明显降低了细胞中neuritin基因的蛋白表达;间接免疫荧光结果显示,4种neuritin siRNA明显减弱了定位于细胞膜上的neuritin蛋白的荧光强度(其中neuritin siRNA4的抑制效果最为明显).由此可知,neuritin siRNA 干扰载体成功构建,且能明显抑制细胞中neuritin的表达.

关键词：neuritin、RNA干扰

所属期刊栏目：30

分类号：R346(人体生物化学、分子生物学)

资助基金：国家自然科学基金项目31060136

在线出版日期：2013-01-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：472-476