Klenow大片段聚合酶及T4DNA聚合酶在构建重组质粒中的应用

摘要：

利用大肠杆菌Klenow大片段聚合酶5'→3'聚合酶活性和T4DNA聚合酶3'→5'外切酶特性构建植物高效表达载体pBLT35Svp4-ST.用pUC18-435S中的T35S启动子取代植物表达载体pBLG-VP4-ST中的双35S启动子,通过Klenow大片段的聚合酶活性对植物表达载体pBLG-VP4-ST中的HindⅢ3'凹端补平,再利用T4DNA聚合酶外切酶活性将质粒pUC18-435S的四倍35S启动子即T35S中的SacⅠ3'凸端削平.在T4DNA连接酶作用下将一端为平端,另一端为BamHⅠ的粘性末端的四倍35S启动子定向连接到植物表达载体PBLG-VP4-ST中取代原有的双35S启动子,转化并筛选阳性克隆.结果经PCR和酶切鉴定证实,四倍35S启动子成功连接到植物表达载体PBLG-VP4-ST中.

关键词：Klenow大片段聚合酶、T4DNA聚合酶、构建、PBLG-VP4-ST

所属期刊栏目：24

分类号：Q784;R378.21(基因工程（遗传工程）)

资助基金：新疆生产建设兵团基金02

在线出版日期：2006-07-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：170-172