10.19732/j.cnki.2096-6210.2021.02.002
99mTc-HYNIC-PTP的制备及其胰腺癌裸小鼠移植瘤模型SPECT显像研究
目的:制备99mTc-肼基烟酰胺(hydrazino-nicotinamide,HYNIC)-网蛋白靶向肽(plectin targeted peptide,PTP),探讨其用于胰腺癌单光子发射计算机断层成像(single photon emission computed tomography,SPECT)的可行性.方法:PTP多肽N端赖氨酸残基游离的氨基分别与HYNIC和异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)反应,制备HYNIC-PTP和FITC-PTP.在三(羟甲基)甲基甘氨酸和乙二胺二乙酸的磷酸盐缓冲生理盐水(phosphate-buffered saline,PBS;pH=6.0)体系中,以SnCl2为还原剂,100℃反应 10 min标记99mTc,得到99mTc-HYNIC-PTP标志物.利用快速薄层色谱(instant thin layer chromatography,ITLC)分析放射化学纯度,以及在室温PBS和37℃胎牛血清中的稳定性.细胞增殖-毒性试验[细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)]评价检测HYNIC-PTP多肽体外对BxPC-3细胞增殖的影响;蛋白质印迹法(Western blot)比较胰腺癌细胞BxPC-3、PANC-1与小鼠胰岛素瘤胰岛β细胞(β-TC-6细胞)内网蛋白(plectin)的表达量;流式细胞术分析FITC-PTP与BxPC-3细胞的体外结合靶向性.建立皮下胰腺癌裸小鼠移植瘤模型,经尾静脉注射99mTc-HYNIC-PTP后,在不同时间点(0.5、1.0、2.0、4.0和6.0 h)进行SPECT,分析肿瘤摄取情况.结果:ITLC分析表明,99mTc-HYNIC-PTP放射化学纯度大于99%,且体外稳定性良好;Western blot证实,plectin在BxPC-3与PANC-1细胞中都高度表达,远高于阴性对照β-TC-6细胞(P<0.001);流式细胞术结果显示,FITC-PTP在阳性对照PANC-1细胞和BxPC-3细胞中的荧光信号强度无明显差异,表明FITC-PTP对BxPC-3细胞具有良好的靶向性.SPECT显像表明,99mTc-HYNIC-PTP在BxPC-3胰腺癌裸小鼠移植瘤模型中具有良好的肿瘤摄取,注射0.5 h后肿瘤部位即有显影,1.0 h后明显增强,2.0 h显影清晰,4.0 h有所下降,6.0 h后肿瘤部位仍有清楚显影.结论:本研究成功制备了99mTc-HYNIC-PTP,方法简便、放射化学纯度高、稳定性好,在胰腺癌裸小鼠移植瘤模型中具有明显的肿瘤浓聚,有潜力成为一种胰腺癌分子影像探针.
胰腺癌、网蛋白、网蛋白靶向肽、99mTc、分子影像探针
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R735.9;R445.5(肿瘤学)
国家自然科学基金81801727
2021-07-05(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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