血浆外泌体提取方法的比较

摘要：

目的 比较超速离心法、膜亲和法、沉淀法提取血浆外泌体的效率.方法 分别采用超速离心法、膜亲和法、沉淀法提取血浆外泌体.采用透射电子显微镜、纳米流式检测仪和动态光散射法检测外泌体的形态、颗粒数、粒径分布及Zeta电位,采用免疫印迹法鉴定外泌体标志性蛋白的表达,采用二喹啉甲酸(BCA)法测定外泌体蛋白浓度,分析颗粒数/蛋白总量比值以评估外泌体的提取纯度.结果 超速离心法、沉淀法和膜亲和法提取的外泌体在透射电子显微镜下均能观察到其立体膜结构,大小为40～100 nm,但沉淀法提取的外泌体混有聚乙二醇(PEG)聚合物及蛋白大颗粒.亲和法提取的外泌体直径大于超速离心法和沉淀法(P<0.05).动态光散射法结果显示3种方法提取的外泌体的Zeta电位均为负值,但测得的外泌体直径偏大.免疫印迹法结果显示3种方法提取的外泌体均表达标志性蛋白.沉淀法提取的血浆外泌体蛋白总量和外泌体颗粒数均高于超速离心法和膜亲和法(P<0.05).超速离心法的提取纯度高于膜亲和法和沉淀法(P<0.05).结论 超速离心法、膜亲和法和沉淀法均能提取出血浆外泌体,应根据实验需求选择合适的方法.

关键词：外泌体、超速离心法、膜亲和法、沉淀法

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分类号：R446.1(诊断学)

资助基金：国家自然科学基金面上项目;国家自然科学基金面上项目;国家自然科学基金青年基金;2017年上海市"上海青年临床医技人才临床检验专业培养"资助计划;上海市科学技术委员会临床医学领域研究项目;上海市临床重点专科建设项目医学检验科;复旦大学附属中山医院院内临床研究项目

在线出版日期：2021-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1224-1228