10.3969/j.issn.1673-8640.2016.06.017
高通量检测戈谢病和尼曼匹克病A/B型的超高效液相色谱-串联质谱法的建立
目的 建立超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)技术测定干血滤纸片中酸性葡萄糖脑苷脂酶(ABG)和酸性鞘磷脂酶(ASM)活性的方法.方法 将干血滤纸片样本提取液与酶作用底物和内标的混合溶液孵育过夜,反应液经萃取、氮气吹干及复溶后采用UPLC-MS/MS检测产物浓度及内标,计算酶活性.评价该方法的线性、精密度和准确性.结果 UPLC-MS/MS测定ABG和ASM活性的批内、批间精密度为3.6%~8.4%,批内、批间准确度为101%~ 115%.正常新生儿中ABG和ASM活性呈偏态分布(P<0.01),以第0.5~ 99.5百分位数法确定ABG及ASM活性的参考区间分别为5.52~49.50和2.02~ 15.44 μmol·L-1·h-1.经临床验证,UPLC-MS/MS能有效检出戈谢病(GD)或尼曼匹克病A/B型(NPA/B)患儿,检出率为100%.结论 UPLC-MS/MS能同时测定干血滤纸片中ABG、ASM活性.该法快速、特异,可用于新生儿中GD、NPA/B的高通量筛查及临床检测.
酸性葡萄糖脑苷脂酶、酸性鞘磷脂酶、串联质谱、干血滤纸片
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R446.5(诊断学)
“十二五”国家科技支撑计划项目2012BAI09B04;上海市科学技术委员会重大课题11dz1950300
2016-08-25(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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