PMA－qPCR 定量检测畜禽肉类中沙门菌活菌的研究

摘要：

目的：将叠氮溴化丙锭（PMA）与实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）相结合定量检测畜禽肉类中活的沙门菌。方法通过优化光反应时间、PMA 浓度等 PMA 作用条件，建立 PMA－qPCR 方法，构建重组质粒建立标准曲线，考察该方法的灵敏性、特异性，并将该方法用于定量检测未经增菌培养的畜禽肉类样品中的沙门菌。结果在 PMA 浓度为15μg／mL、曝光5 min 的条件下可完全抑制样品中死菌 DNA 的扩增。建立的定量标准曲线循环阈值（Ct 值）与质粒标准品模板的拷贝数呈良好线性关系（r 2＝0．9979），最低可检出10拷贝／反应体系。所建立的 PMA－qPCR 方法最低可检出21拷贝／μL 沙门菌。采用 PMA－qPCR 检测人工染菌鸡肉样品，最低可检出103 CFU／mL沙门菌。结论用 PMA－qPCR 方法可实现定量检测畜禽肉类样品中活的沙门菌，从而达到快速检测的目的。

关键词：沙门菌、活菌、叠氮溴化丙啶、荧光定量聚合酶链反应、畜禽肉类

分类号：R378.2(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：上海市卫生系统优秀学科带头人计划新百人计划资助项目XBR2011051

在线出版日期：2015-06-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：500-506