甲胎蛋白-增强型绿色荧光蛋白重组体的构建表达及其测量特性分析

摘要：

目的：构建增强型绿色荧光蛋白（eGFP）标记的甲胎蛋白（AFP）的融合蛋白，并对其稳定性和测量特性进行分析。方法从pcDNA3．0质粒中扩增eGFP序列，插入质粒PET28a，构建eGFP表达质粒PET28a-eGFP。根据美国国立生物技术信息中心（NCBI）数据库中的AFP编码序列，应用序列合成方法合成AFP编码序列，并加入连接eGFP的铰链序列，与eGFP序列链接，构建表达质粒PET28a-eGFP-AFP。分别表达和纯化重组蛋白eGFP和eGFP-AFP，分析重组蛋白的荧光特性及稳定性。结果成功构建和纯化重组蛋白eGFP和eGFP-AFP，荧光光谱分析显示其激发和发射光谱一致。最佳激发波长和发射波长分别为450和509 nm，且荧光可以稳定12个月。表达的eGFP-AFP 蛋白可以与常规测定 AFP 的免疫试剂发生反应。结论构建表达的重组蛋白eGFP-AFP的荧光特性与eGFP蛋白一致，没有光谱特性变化，并可与常规AFP测定试剂发生反应，为研究eGFP标记的AFP用于校准品和质控品的研究奠定基础。

关键词：甲胎蛋白、绿色荧光蛋白、荧光光谱、融合蛋白、校准品

分类号：R446.1(诊断学)

资助基金：上海市科委自然科学基金资助项目09ZR1427300

在线出版日期：2014-07-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：659-663