与α-烯醇化酶相关的抗内皮细胞抗体ELISA的建立及临床初步应用

摘要：

目的 建立与α-烯醇化酶(ENOI)相关的抗内皮细胞抗体(AECA)的酶联免疫吸附试验(ELISA),并探讨ENOI-AECA与自身免疫性疾病的关系.方法 人工合成获得人ENOI基因编码序列并克隆该片段构建pUC57-ENOI重组质粒,再将重组质粒亚克隆入原核表达载体pET28 (a),回收酶切产物并经T4DNA连接酶连接,获得的重组表达质粒pET28 (a) -ENOI,在大肠埃希菌BL21( DE3)中诱导表达蛋白,Ni NTA亲和层析纯化重组ENOI蛋白.以纯化的重组蛋白为包被抗原,并对ELISA反应条件进行优化,初步建立检测ENOI-AECAELISA并作分析性能评价.用建立的方法分别检测健康人及系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿性关节炎(RA)患者血清中的ENOI-AECA.结果 获得了相对分子质量为47 000的高纯度人ENOI重组蛋白.ELISA抗原最佳包被浓度为5 μg/mL,血清最佳稀释倍数为1:50.以免疫印迹法为参照,所建方法的敏感性和特异性分别为76.0％和90.2％.SLE和RA患者血清中ENOI-AECA的阳性率分别为23.1％和57.1％；RA组ENOI-AECA阳性率与健康对照组比较,差异有统计学意义(P -0.000).结论 以人ENOI重组蛋白为抗原建立的检测ENOI-AECA的ELISA有较高的敏感性和特异性,可用于ENOI-AECA的检测.ENOI-AECA阳性提示患者可能患有自身免疫性血管炎.

关键词：α-烯醇化酶、抗内皮细胞抗体、酶联免疫吸附试验、自身免疫性疾病

所属期刊栏目：26

分类号：Q556(酶)

资助基金：上海市卫生局科研计划资助项目2008203

在线出版日期：2012-04-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：836-839