shRNA沉默IRS-1基因对鼠前脂肪细胞分化和PPARγ表达的影响

摘要：

目的 观察胰岛素受体底物-1(IRS-1)基因表达受阻对小鼠3T3-L1前脂肪细胞分化和脂质过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达的影响.方法 针对小鼠IRS-1基因开放阅读框上的2个区域合成短发夹核糖核酸[shRNA(M和MH)],以pGenesil-1 vector为载体构建带绿色荧光蛋白(GFP)靶标的shRNA质粒.以脂质体LipofectaminTM2000介导转染3T3-L1前脂肪细胞,并设阴性对照(HK)载体转染组.细胞转染后,G418筛选稳定表达的阳性克隆并通过免疫印迹法鉴定.应用0.5 mmol/L 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)、10-6 mol/L地塞米松(DEX)和5 μg/mL胰岛素(Ins)分别诱导小鼠3T3-L1前脂肪细胞空白对照组、HK载体转染组、M和MH转染组分化,在诱导分化的不同时间点收集细胞.用免疫印迹法检测PPARγ的表达.脂肪细胞内脂滴用油红O染色观察.结果 与空白对照组、HK组和转染M组IRS-1 shRNA质粒的3T3-L1前脂肪细胞相比,转染MH组IRS-1 shRNA质粒的3T3-L1前脂肪细胞IRS-1蛋白表达水平降低70%以上;而MH转染组细胞PPARγ蛋白的表达与前3组3T3-L1前脂肪细胞比较无改变.前3组3T3-L1前脂肪细胞诱导分化为成熟脂肪细胞成功,PPARγ蛋白的表达在脂肪细胞分化成熟过程中逐渐增高.油红O染色显示,随着脂肪细胞的分化成熟,桔红色脂滴逐渐增多;而转染MH组IRS-1 shRNA质粒的3T3-L1前脂肪细胞经诱导,油红O染色桔红色脂滴显着减少,直到分化的第8天,才见少许桔红色脂滴,且PPARγ蛋白的表达无变化.结论 IRS-1基因沉默后可抑制3T3-L1前脂肪细胞的分化,并在分化过程中抑制PPARγ的表达,说明IRS-1通过调节PPARγ的表达或与PPARγ共同作用在3T3-L1前脂肪细胞的分化中发挥决定性作用.

关键词：胰岛素受体底物-1、脂质过氧化物酶体增殖物激活受体γ、RNA干扰、3T3-L1前脂肪细胞

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分类号：R446.1(诊断学)

资助基金：国家自然科学基金项目资助30872617、30400218

在线出版日期：2010-10-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：596-600