茎环引物的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测miR-155表达及其临床初步应用

摘要：

目的 建立茎环状逆转录引物(简称茎环引物)的SYBR GreenⅠ实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR),并作初步应用.方法 应用SYBR GreenⅠ实时FQ-PCR检测CD4+T细胞株的miR-155,初步验证方法 的可行性.用所建立的方法 对60份临床宫颈刮取物标本进行检测,分析miR-155与宫颈癌及感染的高危型人类乳头状瘤病毒(HPV)基因型别的关系,其聚合酶链反应(PCR)反应产物通过电泳验证产物特异性.结果 所建方法 能特异的检测到miR-155的扩增信号,最低检出限为10-7 nmol/L, 在10-1～10-6 nmol/L之间有良好的线性关系,相关系数(r)为0.99,扩增后惟一的熔解曲线特异峰显示很好的特异性.CD4+T细胞株及60例临床宫颈刮取物标本miR-155均显示阳性, PCR反应产物电泳可获得单一条带.宫颈刮取物miR-155与宫颈癌有关(P<0.05),但与本研究涉及的HPV基因型别无关(P>0.05).结论 所建立的茎环引物的SYBR GreenⅠ实时FQ-PCR能快速、敏感、特异地检测细胞株和临床宫颈刮取物miR-155的表达水平,为进一步研究miR-155及其临床应用奠定了基础.

关键词：微小RNA、逆转录聚合酶链反应、miR-155、SYBR GreenⅠ

所属期刊栏目：25

分类号：Q503(一般性问题)

在线出版日期：2010-06-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：296-300