人regucalcin cDNA高表达重组质粒的构建及其在原核细胞中的表达

摘要：

目的原核表达获得大量人regucalcin(RGN)蛋白.方法用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术从人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2)中扩增RGN全长cDNA,将扩增的产物连接于测序载体pMD18-T,测序鉴定准确后,进行酶切,将正确的RGN全长cDNA与原核表达载体pET42b(+)构建成重组质粒pET42b(+)-RGN.将pET42b(+)-RGN先转化入大肠杆菌DH5α,提取质粒经双酶切鉴定正确后,再转化入表达宿主大肠杆菌DE3菌株.对转化菌株进行诱导、破菌,进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)与免疫印迹分析,鉴定RGN融合蛋白质表达的正确性.RGN重组融合蛋白经Ni2+亲和层析纯化,达电泳纯.结果构建了重组质粒pET42b(+)-RGN并获得高效表达,RGN重组融合蛋白经异丙基硫化-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导后以包涵体形式存在,表达的蛋白质相对分子质量为34 000.结论人RGN蛋白在pET42b(+)原核表达载体可获得高效表达,为进一步了解RGN蛋白质的结构、功能及其抗体的制备等奠定了基础.

关键词：Regucalcin、克隆、原核表达

所属期刊栏目：21

分类号：Q503(一般性问题)

资助基金：科技部科研项目2004CB518804;上海市教委资助项目ZDXK2001

在线出版日期：2006-08-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：328-332