脂多糖对小鼠肺成纤维细胞增殖和P27蛋白表达的影响
目的 观察原代培养的小鼠肺成纤维细胞在不同质量浓度的脂多糖(LPS)刺激下的增殖情况并检测P27蛋白的表达情况,以明确LPS对肺成纤维细胞增殖和P27蛋白表达的调控作用.方法 将培养至4～7代的小鼠肺成纤维细胞分为对照组、100 μg/L LPS组(LPS100组)、500 μg/L LPS组(LPS500组)和1 000 μg/L LPS组(LPS1000组).对照组加入PBS,各质量浓度LPS组加入相应终质量浓度的LPS.在LPS刺激后0、24、48、72 h采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测各组小鼠肺成纤维细胞的增殖情况.在LPS刺激后24 h采用实时荧光定量PCR技术检测小鼠肺成纤维细胞P27的mRNA表达水平,并通过Western印迹法和免疫荧光技术比较小鼠肺成纤维细胞经不同质量浓度LPS刺激48 h后P27的蛋白质表达情况.结果 不同质量浓度的LPS刺激小鼠肺成纤维细胞后能引起细胞增殖,LPS刺激后24 h,LPS1000组细胞增殖速率显著高于对照组(P＜0.01);刺激后48 h,LPS100组、LPS500组和LPS1000组肺成纤维细胞的增殖速率均显著高于对照组(P值均＜0.01);刺激后72 h,LPS500组和LPS1000组肺成纤维细胞的增殖速率均显著高于对照组(P值均＜0.01).LPS刺激后24 h,LPS500组和LPS1000组P27的mRNA表达水平均显著低于对照组(P值分别＜0.05、0.01).LPS刺激后48 h,Western印迹法和免疫荧光实验结果显示,LPS100组、LPS500组和LPS1000组的P27的蛋白质表达量和绿色荧光强度均显著低于对照组(P值分别＜0.05、0.01、0.01).结论 肺成纤维细胞的增殖可能是LPS诱导的脓毒症相关性肺纤维化发生的机制之一,该过程可能与P27蛋白表达下调有关.
脂多糖类、肺纤维化、脓毒症、肺成纤维细胞、增殖
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R730.21;R563;S828
国家自然科学基金81700060
2018-11-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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