microRNA-136影响静脉平滑肌细胞增殖和迁移的作用机制
目的 探讨microRNA-136 (miR-136)对静脉平滑肌细胞增殖、迁移的影响及其作用机制.方法 建立大鼠颈总动脉自体移植静脉模型,并于体外培养静脉平滑肌细胞.采用CCK (cell counting kit)-8和EDU(5-Ethynyl-2'-deoxyuridine)实验检测细胞增殖情况,Transwell和细胞划痕实验检测细胞迁移情况,荧光定量PCR检测移植1、2、4周后和体外培养静脉平滑肌细胞中miR-136的相对表达量,免疫印迹法检测Steap3蛋白质表达量,免疫荧光法检测蛋白Steap3在细胞内的定位情况.通过microRNAs专业网站预测筛选可能的下游基因,并利用双荧光素酶报告基因验证.结果 荧光定量PCR结果显示,移植1、2周后移植静脉miR-136的相对表达量分别为0.46±0.33、0.37±0.30,显著低于对侧未处理静脉(P值分别＜0.05、0.01);移植4周后移植静脉miR-136的相对表达量为1.39±0.82,与对侧未处理静脉的差异无统计学意义(P＞0.05);处于增殖状态的静脉平滑肌细胞中miR-136的相对表达量为0.11±0.01,显著低于处于非增殖状态的细胞(P＜0.05).CCK-8实验结果显示,阴性对照(NC)+血清组的光密度(D)值为0.96±0.03,显著高于NC组的0.62±0.02和模拟物+血清组的0.76±0.08(P值均＜0.05).EDU实验结果显示,NC+血清组EDU标记的阳性细胞百分比为(52.71±2.57)％,显著高于NC组的(13.91±3.43)％和模拟物+血清组的(32.56±3.26)％(P值均＜0.01).Transwell实验结果示,NC+血清组细胞迁移数为(53.13±16.36)个/视野,显著多于NC组的(8.09±5.44)个/视野和模拟物+血清组的(8.08±0.85)个/视野(P值均＜0.05);细胞划痕实验结果显示,NC+血清组细胞24 h迁移率为(45.40±1.17)％,显著高于NC组的(19.27±0.31)％和模拟物+血清组的(22.36±5.55)％(P值均＜0.01).免疫印迹法检测结果显示,NC+血清组的Steap3蛋白质相对表达量为0.91±0.07,显著高于NC组的0.52±0.10和模拟物+血清组的0.15±0.01(P值均＜0.01).免疫荧光染色结果显示,Steap3蛋白质主要定位于细胞质,NC+血清组的Steap3免疫荧光强度显著高于NC组和模拟物+血清组.双荧光素酶报告基因检测结果显示,野生型组的荧光素酶活性为1.59±0.21,显著低于对照组的4.39±0.92和突变型组的4.51±1.12(P值均＜0.01),而对照组与突变型组的荧光素酶活性的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 miR-136可能通过靶基因Steap3抑制静脉平滑肌细胞增殖和迁移,其有望成为抑制移植静脉内膜新生的潜在治疗靶点.
microRNA-136、新生内膜增生、静脉平滑肌细胞、增殖、迁移
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R780.2;R392;R622.4
国家自然科学基金11172176
2016-06-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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