核因子E2相关因子2基因沉默对缺氧预处理骨髓间充质干细胞凋亡的影响
目的 探讨核因子E2相关因子2(Nrf2)基因沉默对缺氧预处理骨髓间充质干细胞(MSC)凋亡的影响,为干细胞移植治疗心肌梗死提供较优良的种子细胞.方法 将沉默小干扰RNA(siRNA) Nrf2的慢病毒载体(LV-GFP-siRNA-Nrf2)转染入大鼠MSC (GFP-LV-MSCNrf2-/-,简称MSCNrf2-/-),采用Western印迹法检测Nrf2基因RNA干扰(RNAi)前后的蛋白质表达变化.实验细胞经缺氧预处理后分入4组:缺氧沉默Nrf2的MSC组(MSCNrf2-/-缺氧组),缺氧常态Nrf2的MSC组(MSCNrf2+/-缺氧组),沉默Nrf2的MSC组(MSCNrf2-/-常氧组),常态Nrf2的MSC组(MSCNrf2+/-常氧组).采用Annexin V/7-AAD染色结合流式细胞术检测细胞凋亡情况,细胞免疫荧光法测凋亡蛋白天冬氨酸半胱氨酸蛋白酶(Caspase)3的表达水平,Western印迹法测定Nrf2及其下游靶点血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白质表达水平,以及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达水平.结果 干扰细胞内Nrf2蛋白质后,MSCNrf2-/-常氧组的Nrf2核蛋白表达水平显著低于MSCNrf2+/-常氧组(P＜0.05).细胞缺氧后6h,MSCNrf2+/-缺氧组和MSCNrf2-/-缺氧组的细胞早期凋亡率和晚期凋亡率均显著高于MSCNrf2+/常氧组和MSCNrf2-/-常氧组(P值均＜0.05),MSCNrf2-/-缺氧组的细胞早期凋亡率和晚期凋亡率均显著高于MSCNrf2+/-缺氧组(P值均＜0.05).MSCNrf2-/-缺氧组见大量Caspase3蛋白质表达,MSCNrf2+/-缺氧组Caspase3蛋白质表达减少;MSCNrf2+/-常氧组和MSCNrf2-/-常氧组均未见Caspase3蛋白质明显表达.MSCNrf2+/-常氧组与MSCNrf2-/-常氧组间Nrf2、HO-1、Bcl-2、Bax蛋白质表达水平的差异均无统计学意义(P值均＞0.05).与MSCNrf2+/-常氧组比较,MSCNrf2+/-缺氧组的Nrf2、HO-1、Bax蛋白质水平均显著升高(P值均＜0.05),Bcl-2蛋白质表达水平显著降低(P＜0.05);MSCNrf2-/-缺氧组的Nrf2、HO-1、Bcl-2蛋白质表达水平均显著降低(P值均＜0.05),Bax蛋白质表达水平显著升高(P＜0.05).与MSCNrf2+/-缺氧组比较,MSCNrf2-/-缺氧组的Nrf2、HO-1、Bcl-2蛋白质表达水平均显著降低(P值均＜0.05),Bax蛋白质表达水平显著升高(P＜0.05).结论 沉默细胞中的Nrf2基因可显著降低干细胞对缺氧的耐受能力,进一步加速细胞凋亡.
心肌梗死、核因子E2相关因子2、小干扰RNA、骨髓间充质干细胞、细胞凋亡
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国家自然科学基金NSFC 81360021、贵州省科学技术基金黔科合J字号LKZ”2012”29号资助项目
2016-03-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
839-843,封3
