竞争性等位基因特异的TaqMan聚合酶链反应法和DNA直接测序法检测KRAS G12D突变的对比分析
目的 对比分析竞争性等位基因特异的TaqMan聚合酶链反应(castPCR)法和DNA直接测序法检测肠镜活组织检查标本KRAS G12D突变的差异.方法 应用活组织检查钳收集肠镜下结直肠腺瘤和结直肠癌组织,抽提组织DNA,分别采用castPCR法和DNA直接测序法获得KRAS G12D的突变情况.结果 腺瘤组和腺癌组castPCR法检测的KRAS G12D突变率均显著高于同组DNA直接测序法(P值均＜0.05),两组间castPCR法和DNA直接测序法检测的KRAS G12D突变率的差异均无统计学意义(P值均＞0.05).腺瘤组两种检测方法的突变型符合率为55.6％,野生型符合率为100.0％,阴性符合率为100.0％,总体符合率为87.5％,一致性检验Kappa值为0.643 5;腺癌组两种检测方法的突变型符合率为50.0％,野生型符合率为100.0％,阴性符合率为100.0％,总体符合率为85.0％,一致性检验Kappa值为0.583 3.提示两种方法检测阴性的一致性程度均较高,但检测阳性的一致性程度一般.Mutation Detector分析结果显示,castPCR法能够检测出突变量＜1％的突变,灵敏度高达0.1％.检测突变量分析结果显示,当KRAS G12D突变量≥4％时,castPCR法和DNA直接测序法检测KRAS G12D均为阳性;当突变量＜4％时,仅castPCR法能够检测出KRAS G12D为阳性.提示castPCR法能够检测出DNA直接测序法检测不出的KRAS G12D突变,较DNA直接测序法效率高.结论 castPCR法能够高效地检测肠镜活组织检查标本中低突变量的KRAS G12D,其临床实用价值较DNA直接测序法高.
竞争性等位基因特异的TaqMan聚合酶链反应、肠镜活组织检查标本、KRAS G12D
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R734.2;R512.6;R37
国家自然科学基金81322010
2016-03-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
820-823,前插1
