抗心磷脂抗体IgG和IgM双标记时间分辨荧光免疫分析法的建立和应用
目的 评价新建立的双标记时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA法)检测抗心磷脂抗体(ACA) IgG和IgM的临床应用价值.方法 以心磷脂抗原(含β2糖蛋白Ⅰ段)包板,以稀土元素铕离子(Eu3+)和钐离子(Sm3+)分别标记抗人IgG抗体和抗人IgM抗体建立双标记TRFIA法.收集510例自身免疫性疾病患者(硬皮病24例、肾病综合征36例、强直性脊柱炎16例、脑梗死117例、狼疮性肾炎33例、干燥综合征63例、系统性红斑狼疮153例、类风湿关节炎70例)和50名健康献血者的血清标本,采用双标记TRFIA法测定ACA-IgG型抗体和ACA-IgM型抗体的临床阳性率和特异度.评估双标记TRFIA法检测高、中、低值样本的精密度.将3份已知浓度血清标本作倍比稀释,计算ACA-IgM型抗体和ACA-IgM型抗体的回收率.与酶联免疫吸附试验(ELISA法)的结果进行比对,分析双标记TRFIA法与ELISA法检测结果的一致性和稳定性等.结果 双标记TRFIA法检测ACA-IgG型抗体和ACA-IgM型抗体标准曲线的R2值分别为0.999、0.993,荧光强度值与样本浓度呈线性相关.ACA-IgM型抗体高、中、低3个浓度的批内变异系数(CV)分别为1.31％、2.82％、4.14％,批间CV分别为2.29％、4.08％、6.97％;ACA-IgG型抗体高、中、低3个浓度的批内CV分别为1.21％、3.18％、4.61％,批间CV分别为2.26％、3.93％、7.34％.双标记TRFIA法检测ACA-IgM型抗体和ACA-IgG型抗体的灵敏度均为0.1 U/mL,特异度均为98.00％(49/50).ACA-IgG型抗体回收率为95.11％～106.14％,ACA-IgM型抗体回收率为96.04％～106.54％.硬皮病、肾病综合征、强直性脊柱炎、脑梗死、狼疮性肾炎、干燥综合征、系统性红斑狼疮、类风湿关节炎患者ACA-IgG型抗体阳性率依次为16.67％、2.78％、7.14％、3.42％、15.15％、4.76％、7.84％、8.57％,ACA-IgM型抗体阳性率依次为4.17％、11.11％、14.29％、3.42％、27.27％、3.17％、8.50％、10.00％.双标记TRFIA法检测ACA-IgM型抗体和ACA-IgG型抗体的结果与ELISA法均呈正相关(R2值分别为0.928、0.924,P值均＜0.05).双标记TRFIA法检测ACA-IgM型抗体和ACA-IgG型抗体的荧光强度值分别下降14.7％和15.8％,ELISA法检测ACA-IgM型抗体和ACA-IgG型抗体的光密度值分别下降37.6％和33.9％.结论 双标记TRFIA法同时检测ACA-IgG型抗体和ACA-IgM型抗体具有效率高、灵敏度高、特异性强、检测范围宽和稳定的优点,其临床应用价值高,应用前景广阔.
抗心磷脂抗体、双标记免疫检测、时间分辨荧光免疫分析法
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R512.6;R446.61;S859.7
国家科技支撑计划;无锡市科技局指令性科研项目
2015-02-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
970-974
