分离鉴定人胃癌HGC-27细胞系中的肿瘤干细胞
目的 分析人胃癌细胞系HGC-27细胞系中肿瘤干细胞相关的侧群细胞(SP细胞)的比例,分选出相关的SP细胞和非侧群细胞(NSP细胞),检测相关的SP细胞是否具有干细胞的生物学特性.方法 制备人胃癌细胞系HGC-27细胞中细胞悬液,实验组的人胃癌细胞株中加入Hoechst 33342至终浓度为5μg/mL,对照组的人胃癌细胞株中加入Hoechst 33342后再加入维拉帕米至终浓度为50 μg /mL.应用流式细胞仪分选出人胃癌细胞系HGC-27细胞中相关的SP细胞,并进行分析.采用克隆形成实验和四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测相关的SP细胞和NSP细胞增殖能力差异.利用磁珠筛选实验方法测定胃癌细胞系HGC-27细胞中肿瘤于细胞表面特异性抗体.结果 实验组HGC-27细胞中SP细胞亚群所占比例为(6.00±0.05)％,显著高于对照组的(0.10±0.01)％(P＜0.05).选用2×108个对数生长期细胞,经流式细胞仪分选出SP细胞7.5×105个和NSP细胞8.5×10 7个.分选后经低血清培养液(2％胎牛血清)培养后,SP细胞的密度较NSP细胞低,且细胞形态也不同.培养第1～7天SP细胞的光密度值分别为0.13±0.03、0.18±0.04、0.33±0.04、0.41±0.04、0.47±0.07、0.51±0.06、0.55±0.06,NSP细胞的光密度值分别为0.13±0.02、0.16±0.04、0.20±0.04、0.24±0.03、0.28±0.05、0.30±0.06、0.31±0.07,培养第3、4、5、6、7天,SP细胞的光密度值均显著高于NSP细胞(P值均＜0.05).磁珠筛选后经流式细胞仪检测,SP细胞和NSP细胞表面抗原CD133分别为(89.94±28.19)％、(38.22±16.45)％,SP细胞和NSP细胞表面抗原CD44分别为(86.99±23.59)％、(46.09±13.60)％.结论 人胃癌细胞系HGC-27细胞中存在相关的SP细胞,应用流式细胞仪可分选出相关的SP细胞,采用克隆形成实验和MTT法检测相关的SP细胞和NSP细胞增殖能力有差异.人胃癌细胞系HGC-27细胞中相关的SP细胞可能具有肿瘤干细胞特性.
胃癌、肿瘤干细胞、HGC-27细胞、侧群细胞亚群、磁珠筛选
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D918.9;R735.2;S852.65
上海市卫生局科学基金2010Y079
2015-02-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
957-961,前插3
