人肌细胞增强因子2A基因病毒载体构建及嗜铬细胞瘤PC12稳转细胞系的建立和鉴定

摘要：

目的 构建表达肌细胞增强因子2(MEF2)A基因的反转录病毒载体,并观察稳定感染嗜铬细胞瘤PC12细胞后MEF2A蛋白的表达情况.方法 用EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切pcDNA3-MEF2A-flag质粒,得到MEF2-flag基因的编码序列,定向插入到pBabe-puro载体中,经扩增、筛选阳性克隆、酶切和测序验证后,转染293T细胞进行病毒包装、扩增、纯化后获取反转录病毒颗粒.将反转录病毒颗粒感染PC12细胞,经嘌呤霉素筛选后抗性克隆集落长出.采用Western印迹法检测MEF2-flag的表达情况.结果 连接重组后经酶切和测序筛选出pBabe-MEF2A-flag.转染pBabe-MEF2A-flag的PC12的细胞组中MEF2A的含量为2.03±0.06,显著高于空载体对照组的1.00±0.04(P＜0.01).结论 成功构建pBabe-MEF2A-flag反转录病毒载体,并建立了其稳定转染的PC12细胞系.

关键词：肌细胞增强因子2、PC12细胞、反转录病毒、稳定转染、神经系统相关疾病

所属期刊栏目：36

分类号：R54;R39

资助基金：国家自然科学基金资助项目81102513、81072703

在线出版日期：2013-05-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：140-142