人源有机阴离子转运多肽1B1和多药耐药相关蛋白2双转MDCKⅡ细胞株的构建及其功能验证

摘要：

目的 构建人源有机阴离子转运多肽1B1 (human organic anion transporting polypeptide 1B1,hOATP1B1)和多药耐药相关蛋白2(multidrug resistance-associated protein 2,hMRP2)双转MDCKⅡ细胞株,验证其功能,并应用其考察创新药物2,3-双加氧化酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)抑制剂1-甲基色氨酸(1-methyl-tryptophan,1-MT)的转运特性.方法 采用基因工程手段获得hOATP1 B1和hMRP2表达真核载体pVITRO2-SLCO1 B1-ABCC2,转染MDCKⅡ细胞,通过遗传霉素G418筛选得到稳定表达的细胞株;通过Realtime PCR、Western blot、免疫荧光共聚焦显微镜确认目的蛋白特异性;利用该双转模型考察普伐他汀(不同pH环境和不同底物浓度)和1-MT的转运.结果 经电泳分析、双酶切、DNA测序鉴定表明重组质粒构建成功;通过Real-time PCR、Western blot、免疫荧光共聚焦显微镜证明经遗传霉素筛选的MDCK-OATP1 B1/MRP2细胞构建成功;pH=6.5时,普伐他汀在所构建双转细胞模型上转运最佳;在0～500 μmol/L的浓度范围内,普伐他汀在该模型上的转运呈现浓度依赖性.1-MT在该细胞模型上无明显转运.结论 成功构建人源MDCK-OATP1 B1/MRP2双转细胞株,发现1-MT既不是OATP1B1蛋白也不是MRP2蛋白的底物,该细胞株可用于OATP1 B1/MRP2介导的外源性物质(如药物)和内源性物质(如胆红素)的转运研究.

关键词：有机阴离子转运多肽1B1、多药耐药相关蛋白2、MDCKⅡ、普伐他汀、1-甲基色氨酸、转运

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分类号：R965.1;Q233(药理学)

资助基金：国家自然科学基金面上项目81573310,81374051;高等学校博士学科点专项科研基金20130071110037.This work was supported by the General Program of National Natural Science Foundation of China81573310,81374051;the Research Fund for the Doctoral Program of Higher Education of China20130071110037

在线出版日期：2017-05-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：134-142