利用多重数字PCR检测KRAS相关突变

摘要：

目的 建立多重数字PCR体系检测血浆细胞游离DNA(cell-free DNA,cfDNA)中KRAS第2外显子12、13密码子的7种突变.方法 构建7种KRAS突变型质粒用以建立多重数字PCR检测体系,以灵敏度、特异度和动态范围为主要参数评估体系的性能.利用该体系检测15例手术可切除的胰腺导管腺癌(pancreatic ductal adenocarcinoma,PDAC)患者血浆cfDNA中KRAS第2外显子12、13密码子突变情况,并与ARMs的检测结果进行比对.结果 自建的多重数字PCR在0.01％～10％的动态范围内线性良好.两个检测体系的灵敏度分别可达到0.025％和0.043％.15名PDAC患者组织中KRAS突变的阳性率达到100％.数字PCR检测血浆cfDNA所得的结果与组织结果的匹配率达到40％,ARMs检测组织和血浆cfDNA结果的匹配率为20％.15例样本中使用多重数字PCR检测到血浆cfDNA的最低丰度达到0.09％.结论 多重数字PCR具备高灵敏度和特异性,可用于准确定量外周血cfDNA中KRAS相关突变的水平.

关键词：多重数字PCR、血浆游离DNA、KRAS

所属期刊栏目：43

分类号：R446.11+9(诊断学)

资助基金：国家自然科学基金面上项目81572064;上海市卫生计生系统重要薄弱学科建设项目2015ZB0201This work was supported by the General Program of National Natural Science Foundation of China81572064;the Key Developing Disciplines of Shanghai Municipal Commission of Health and Family Planning2015ZB0201

在线出版日期：2017-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：697-703,709