活化的大鼠肝星状细胞赖氨酸乙酰化蛋白质组学分析

摘要：

目的 对活化的大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)进行赖氨酸乙酰化(lysine acetylation,Kac)蛋白质组学分析.方法 于清洁级雄性SD大鼠中提取并培养原代HSCs,分为对照组(培养＜2天)和活化组(培养≥10天).对两组细胞进行裂解,iTRAQ/TMT标记后的成对肽段样品采用乙酰化抗体进行亲和富集,应用高分辨率LC-MS/MS技术进行质谱鉴定.最后对质谱鉴定的乙酰化蛋白质进行生物信息学分析.结果 应用LC-MS/MS技术、GO注释和KEGG通路等生物信息学分析方法,共确定309种蛋白质中的470个Kac位点.对其中150个蛋白质的231个Kac位点进行肽段定量研究,与静息的HSCs相比,在活化的HSCs中有109个蛋白质的乙酰化肽段数目增加,18个蛋白质的乙酰化肽段数目减少,并涉及多种GO分类和KEGG通路.乙酰化蛋白质广泛定位于胞质(38.1％)和线粒体(30.2％).基于GO富集的聚类分析显示Kac位点主要与能量代谢相关;基于KEGG通路的聚类分析显示这些蛋白质广泛参与三羧酸循环,与线粒体关系密切.结论 首次对HSCs的Kac蛋白质进行质谱分析,并对发生乙酰化的蛋白质位点进行量化鉴定,为揭示蛋白质乙酰化在HSCs活化过程中的作用提供了一定的基础,并为抑制肝纤维化提供了潜在的分子靶标.

关键词：肝星状细胞、赖氨酸乙酰化、LC-MS/MS、翻译后修饰、大鼠

所属期刊栏目：43

分类号：R364.2;R34(病理学)

资助基金：国家自然科学基金81272387,81470857;上海市自然科学基金134119b1100;广东省自然科学基金博士科研启动项目2015A030310031;深圳市卫计委课题201401048This work was supported by the National Natural Science Foundation of China81272387,81470857;the Natural Science Foundation of Shanghai,China134119b1100;the PhD Start-up Fund of Natural Science Foundation of Guangdong Province,China2015A030310031;the Research Project of Health and Family Planning Commission of Shenzhen Municipality201401048

在线出版日期：2016-11-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：513-521