人源吲哚胺2,3-双加氧酶-2的表达与纯化

摘要：

目的 构建人源吲哚胺2,3-双加氧酶-2(human indoleamine 2,3-dioxygenase-2,hIDO2)原核表达载体,表达、纯化获得hIDO2蛋白.方法 采用基因工程手段获得hIDO2原核表达载体并转化表达菌株,筛选合适的重组质粒及异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropy-β-D-thiogalactoside,IPTG)浓度进行蛋白表达;通过亲和层析纯化重组hIDO2,BCA法测定蛋白浓度并计算蛋白收率;SDS-PAGE电泳检测hIDO2表达情况,通过软件分析得到蛋白纯度;Western blot检测目的蛋白特异性.结果 重组质粒经电泳分析、双酶切、D.NA测序鉴定表明构建成功;经筛选发现重组质粒pET28a-hIDO2比pGEX-4T-1-hIDO2的hIDO2表达效果好;SDS-PAGE电泳及Western blot均验证了在相对分子质量45 000处的特异性目的条带的存在;经测定及计算得出蛋白纯度为97.1％,蛋白浓度为20 mg/mL,蛋白收率为15 mg/L.结论 成功构建重组质粒用于表达及纯化hIDO2,蛋白浓度、纯度、收率及特异性均较高.

关键词：吲哚胺2、3-双加氧酶-2、人源、蛋白表达、蛋白纯化

所属期刊栏目：43

分类号：Q331;Q786(人工选择与自然选择)

资助基金：the National Natural Science Foundation of China81373396,81573310;the Research Fund for the Doctoral Program of Higher Education of China 20130071110037.国家自然科学基金81373396,81573310;高等学校博士学科点专项科研基金20130071110037

在线出版日期：2016-09-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：401-408